地中海贫血是我国南方各省影响最大、发病率最高的遗传病之一，多见于广东、广西、云南、海南等省。重型地贫患儿需要终生输血治疗，常因慢性溶血性贫血和铁离子负荷，导致肝脾肿大、心肌损害，最终治疗无效死亡。中间型地贫患者也会因持续的慢性溶血性贫血而出现生长发育迟缓、体能低于正常人。轻型地中海贫血可无临床症状，极易被漏诊、误诊。世居于云南省内，人口超过百万的少数民族如傣族、壮族已经被报道是地贫高发的民族。不同民族地贫类型构成比以及发病情况有较大区别，对地贫高发地区进行流行病学研究有助于地贫防控的有效开展，但目前为止尚无明确系统的研究了解云南省儿童地贫状况特别是少数民族中血红蛋白病的流行状况。本文报道西双版纳勐海县妇幼保健院2013年2月至2013年7月期间，对103例儿童进行地贫筛查及地贫家系研究的临床研究结果。 
1资料和方法 
1.1资料来源 
研究对象为2013年2月-2013年7月在云南省西双版纳州勐海县妇幼保健院进行体检的6月-6岁儿童103人，同时对患者进行血常规、血红蛋白电泳筛查以及地贫基因诊断，同时登记登记受检者的姓名、编号、民族、籍贯、年龄等信息，血红蛋白电泳、血常规资料和基因诊断结果输入Excel软件数据库中保存。 
1.2方法 
1.2.1血红蛋白电泳筛查 
受检者进行检查时抽取受检儿童静脉血2ml，EDTA抗凝，4-8℃冷藏保存1-5天内检测。采用血红蛋白电泳法定量检测各血红蛋白成份的比例，分析异常血红蛋白区带。 
1.2.2血常规检测 
用贝克曼LH750型全自动血液分析仪进行检测，主要观察的参数：平均红细胞血红蛋白量（MCH）、平均红细胞体积（MCV）、红细胞血红蛋白量（Hb）、红细胞体积分布宽度（RDW）以及平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）。α-地贫分子筛查的血液学指标是：MCV<80fL，MCH<27Pg，HbA2<2.5%；β-地贫进行分子筛查的血液学指标是：①MCV<80 H，MCH<27pg和HbA2>3.5%；②表现出HbE电泳带或者其它异常条带；③HbF>5.0%。 
1.2.3地贫基因诊断 
α-或β-珠蛋白基因常见突变检测：使用深圳亚能生物技术有限公司生产的地贫基因诊断试剂盒，采用PCR-反向斑点杂交法（PCR-reversed dot blotting，PCR-RDB），检测中国人群。β-珠蛋白基因常见17个位点的18种突变；采用多重PCR法检测。一珠蛋白基因常见的3种缺失：-SEA（东南亚缺失型）、-α3.7（右缺失型）、-α4.2（左缺失型）。 
1.2.4珠蛋白基因单倍型分析 
对9例本次确诊。一地贫和以往收集的7例确诊β-地贫的家系，进行β-珠蛋白基因单倍型的研究。采用基于PCR的RFLP技术和家系连锁分析方法确定先证者两条β-地贫染色体的单倍型，选择的7个RFLP位点分别是：Hind Ⅱ-5′ε，HindⅢ-Cγ，Hind Ⅲ Aγ，Hind Ⅱ-ψβ，HincⅡ-3′ψβ，AvaⅢ-β，BamHI-3′β。引物、实验条件以及单倍型命名原则参见文献。 
2结果 
2.1地贫基因诊断结果 
对103例儿童进行血常规联合血红蛋白电泳筛查；根据筛查结果，α-地贫筛查阳性病例进行3种缺失型。α-地贫的检测，β-地贫筛查阳性病例进行18种常见β-地贫的检测以及3种缺失型。α-地贫的检测。共检出14例。α-地贫，9例β-地贫（2例为重症β-地贫患儿），2例α-地贫合并β-地贫（-α3.7合并CD17型1例，-α4.2合并CD26型1例）。α-地贫的基因携带率是15.53%（16/103），β-地贫的基因携带率是12.62%（13/103）。 
2.2基因单倍型分析结果 
使用连锁分析和RFLP技术分析共16例确诊β-地贫的家系的基因单倍型，其中有7个家系未能提供连锁信息，不能检测出基因单倍型类型。9例确诊。β-地贫的家系中，发现CD41-42突变类型有三种相关的基因单倍型类型（Ⅶ、Ⅴ、Ⅰ），CD17突变类型的基因单倍型为Ⅶ，CD26突变类型的基因单倍型为Ⅲ、CD27/28突变类型的基因单倍型为Ⅳ。共发现5种与β-地贫相关的基因单倍型类型，其中以类型Ⅶ最为多见。 
3讨论 
血红蛋白电泳联合血常规在地中海贫血筛查过程中起非常重要的作用，其能够定量检测各种血红蛋白水平，并将地中海贫血初步分为α-型和β-型，为进一步进行基因诊断和遗传咨询提供基础。血液学筛查对静止型地中海贫血患者存在漏诊风险，且年龄小于1岁儿童，血液中HbF水平较高会对筛查产生干扰。对于α-地贫合并β-地贫的情况，血红蛋白电泳多显示为HbA2的明显升高，临床上对疑似β-地贫的患者，需要加做α-地贫的基因诊断（研究中检出2例α-地贫合并β-地贫的病例）。此外，儿童及婴幼儿不宜多次反复抽血。综合以上几点原因，我们在研究人群中一次抽取静脉血2ml，直接进行血红蛋白电泳联合血常规筛查以及常见。α-、β-地贫的基因诊断，以高效准确的提高检出率。 
本调查表明，勐海县送检儿童α-地贫的检出率是15.53%，β-地贫的检出率是12.62%，西双版纳勐海属于地贫高发地区，受检儿童中有2例为重症。地贫患儿，高达近2%。这样地贫高发的情况与相邻地区泰国的傣族人群地贫发病率相似。西双版纳地贫的单倍型显示出多种类型，提示这些地方的民族可能有多次的遗传交流，显示出丰富的基因多态性。在本地区地贫高发这一背景下，进行地贫筛查并对高危人群以及基层医务人员宣传是有重要意义的，有望减少重型地贫儿的出生率，降低围生儿病死率，提高人口健康素质。地贫贫血的血常规为小细胞低色素性，与小儿缺铁性贫血有着共同点。后者补铁是主要的治疗措施，但地贫患儿由于体内铁沉积不能补铁。在地贫高发地区进行轻型地贫筛查，能提高当地地贫防控意识，可为婴幼儿期贫血的诊断及鉴别诊断提供实验室依据，并提升医务人员对疾病认识的水平，避免不必要的漏诊、误诊和错误治疗。 
本研究在国内首次对西双版纳州少数民族地区儿童进行了地贫流行病学的调查研究，为今后进一步地贫防控与疾病认识提供了科学依据.但本研究样本量较小仅103人，当地人种来源复杂，且就诊儿童会存在选择偏倚，一部分学龄前儿童父母由于认识不到位等原因放弃体检，若真实了解西双版纳地区儿童地贫发病率，还需要进行分层次大样本的流行病学研究。西双版纳地区地贫广泛存在也有必要进一步推广在人群中地贫携带者筛查，对携带者夫妇提供遗传咨询和产前基因诊断服务，提高出生人口素质，促进民族团结，避免重症地贫患儿出生。