王勤
（上海市奉贤区中医医院检验科 上海200000）
【摘要】
目的：对生殖道念珠菌的三种检测方法进行对比分析，探讨每种方法各自临床实用价值。方法：同时用盐水涂片法、革兰氏染色法、科玛嘉显色培养基培养法对756例随机采样的生殖道分泌物标本进行检测。检测结果用统计学方法进行分析。结果：培养法的阳性率最高，革兰氏染色法次之，盐水涂片法的阳性率最低。且三种方法之间的两两比较均有显著性差异（P<0.01）结论：盐水涂片法或革兰氏染色法操作简便，成本低廉，前者适用于门诊临检标本，必要时可配合滴加NAOH以提高阳性检出率，后者可用于妇科病的普查。培养法是临床诊断治疗的最可靠依据，需要时还可进行菌株鉴定及药敏试验。但成本昂贵，且培养时间相对较长。如遇复杂性念珠菌感染时可考虑。
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关键词 生殖道念珠菌；涂片法；染色法；培养法
【中图分类号】R453 【文献标识码】B【文章编号】1674-9561（2015）07-0117-02
念珠菌感染而引起的生殖道炎症是一种女性常见的妇科疾病。生殖道内环境潮湿而且女性的阴道PH值在3.8-4.4为偏酸性很适合念珠菌的生长。一般情况下念珠菌为条件致病菌，。约10%-30%的女性为无症状的念珠菌携带者。有报道表明75%的女性一生中至少会有一次有症状的念珠菌感染。当人体抵抗力下降，或患严重疾病，有复合维生素B缺乏，或长期应用免疫抑制剂时，有利于念珠菌大量繁殖，可出现白带多，外阴及阴道灼热瘙痒等临床表现，严重者可对女性造成不孕、早产、影响胎儿发育及其他一些妇科炎症等。同时，念珠菌易反复感染，迁延不愈，且具有传染性。在生殖道标本中准确地检测出病原体是念珠菌性生殖道感染诊断治疗的重要依据。
笔者采用盐水涂片、革兰氏染色、科玛嘉显色培养基培养三种方法对756例妇科门诊初诊考虑生殖道感染的标本进行念珠菌检测。根据检测结果对三种方法的优缺点进行评价，以便挑选合理的检测方法，提高阳性检出率，为临床的诊断治疗提供帮助。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1革兰氏染色液贝索
1.1.2真菌显色培养基 科玛嘉
1.1.3 0.9%NACL
1.1.4标本来源：2015年5月妇科门诊考虑为生殖道感染的患者随机挑取756例标本。年龄在22-55岁，平均年龄为32.9岁。用无菌棉拭子从女性阴道后穹窿处采取分泌物。
2方法
2.1盐水涂片法：在采集的标本中加入少量生理盐水混匀后涂在玻片上，置显微镜（100×、400×）下直接镜检。镜下观察到假菌丝、孢子、芽生孢子即可报告阳性
2.2革兰氏染色法：在采集的标本中加入少量生理盐水，在玻片上制成薄片，自然晾干后酒精灯火焰固定，革兰氏染色，油镜（1000×）观察。见到革兰氏染色阳性、圆形或卵圆形菌体或孢子及假菌丝即可报告找到念珠菌。
2.3培养法：将采集的标本接种在科玛嘉念珠菌显色培养基上，35℃，需氧环境，培养24-48小时。如有菌落生长即观察菌落形态和颜色，并涂片革兰氏染色、镜检可见假菌丝和芽生孢子。即可初步判断某种念珠菌生长。（虽然该培养基可抑制其他细菌生长，但有些耐药的非念珠菌株偶尔也会在平板上生长。故平板上的菌落一定要染色镜检方可确认）
3检测结果
4讨论
4.1目前临床对念珠菌性阴道炎的确诊主要依据是在生殖道分泌物中找到念珠菌。所以选择合理的检测方法对提高念珠菌的阳性检出率很重要。通过统计学方法得出结论是三种方法方法之间两两比较均有统计学差异。培养法的阳性检测率最高。盐水涂片法的阳性检测率最低。这一结论与资料［1］报道的革兰氏染色法阳性率最高的结论有差异。
4.2虽然盐水涂片法的检测率较低但作为经典、传统的检测方法，其还是有一定的检测优势的。它具有检测时间短、成本低廉等优点，除了能直接观察到念珠菌外还可以进行脓细胞，线索细胞，滴虫、清洁度等方面的观察。能够给临床提供较为全面的资料。但是可能受到清洁度的影响在念珠菌量少或不典型时会漏检。所以这一方法对操作人员的技术水平要求相对其他两种方法较高。针对容易漏检的缺陷，可先进行盐水涂片法观察后加入1滴10%的NAOH全面混匀后观察。KOH可降解分泌物中的一些糖蛋白，溶解消化其它细胞成分，使假菌丝和孢子更易观察，可大大提高检测灵敏度。但应注意勿要将缩小的红细胞和变无尾的精子误认为念珠菌。
4.3革兰氏染色法相对湿片法来说操作过程较为繁琐一点，但耗时也不长，从涂片到得到检测结果也仅需15分钟左右。经革兰氏染色后假菌丝和芽生孢子被染成明显的紫色。盐水涂片法能观察的滴虫、霉菌、白细胞，阴道清洁度等方面也同样能观察到，并且有了颜色的区分，能更加一目了然。但要注意染料沉渣影响结果判断。
4.4本实验所用的培养基为科玛嘉念珠菌显色培养基，与传统意义上的培养鉴定还是略有区别。科玛嘉念珠菌显色培养基根据各类念珠菌生化反应分解不同底物使菌落在培养基上显色。该法在三种检测方法中阳性率最高，不易漏检，同时还可以初步区分部分常见的念珠菌，生殖道最常见的念珠菌如白色念珠菌（绿色）、克柔念珠菌（粉红）、光滑念珠菌（紫色）、热带念珠（蓝灰）均可在显色培养基上生长 ［2］。能鉴定90%以上的念珠菌。据文献报道［3］，显色培养基鉴定结果与VITEK鉴定符合率达98.91%。而其缺点是虽然与传统的培养法相比已经大大缩短了培养时间，但与其他两种方法相比还是耗时较长，且成本较贵。不适宜广泛使用。
4.5三种阴道念珠菌检测方法各有其优缺点。工作中可根据实际情况选择最佳的检测方法。在日常的门诊临检工作中可选用盐水涂片法，必要时可滴加1滴10%的NAOH以提高阳性检出率。盐水涂片法或革兰氏染色法，方便快速、成本低廉，对妇科病的普查和预防有较好的实用价值。而培养法是临床诊断治疗的最可靠依据。尤其适用于临床高度怀疑为念珠菌感染，但多次盐水涂片法未找到念珠菌的病人及阴道念珠菌反复感染、复杂性念珠菌感染患者。必要时可做具体鉴定及药敏试验。
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参考文献
［1］邝琳.廖美英.林虹.三种定性阴道念珠菌检测的比较分析［J］.国际医药卫生导报，2013，19（1）:107-109.
［2］周庭银.倪语星等.临床微生物检验标准化操作［M］.上海：上海科学技术出版社，2010:376.
［3］林青良.黄东红.梁双吟.科玛嘉显色培养基与API20C AUX鉴定系统鉴定念珠菌的比较［J］.福建医科大学学报，2001，34:173.
