李 潇
武汉大学药学院 湖北省武汉市 430072
【摘 要】目的：观察百合花提取物对AChE 活性及抗氧化活性的影响；方法：利用抗AChE 活性试验和DPPH 清除试验观察百合花提取物对AChE 活性及抗氧化活性影响；结果：三种百合花提取物均有一定的抗AChE 作用和抗氧化作用；结论：百合花提取物的抗AChE 作用及抗氧化作用可为抗老年痴呆提供新线索。
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关键词 百合花；AChE；活性；老年痴呆；清除率；抗氧化
老年痴呆症，是由于大脑器质性损害而引起的脑功能障碍，使记忆、理解、判断、自我控制等能力发生进行性退化和持续性智能损害，病理特征以老年斑、神经纤维缠结和神经元丢失为主[1-2]。它不仅是个体疾病，而且因其带来的社会负担，已成为一个重要的公共卫生问题[3]。
本实验拟从天然产物中寻找AChE 抑制剂及抗氧化剂，为老年痴呆的预防治疗提供新的治疗线索。
1 材料与方法
1.1 试验材料
器材：EP 管、水浴锅、移液枪、紫外分光光度计、96 孔板。
试剂：Buffer B、DTNB、ACTI、DPPH。
受试药：50mg/ml 和100mg/ml 百合花醇提物；
50mg/ml 和100mg/ml 百合花水提物50mg/ml 和100mg/ml 百合花石油醚提取物；
0.01mg/ml 阳性对照加兰他敏；
0.2、0.4、0.8mg/ml 阳性对照还原性VC。
1.2 方法
1.2.1 抗AChE 活性试验
（1）根据下表对1.5ml EP 管进行编号。
做1-12 号受试物
1- 蒸馏水（空白对照）2- 无水乙醇 3、50 mg/ml 百合花水提物 4-100mg/ml 百合花水提物5、50 mg/ml 百合花醇提物 6、100 mg/ml 百合花醇提物7、50 mg/ml 百合花石油醚提取物 8-100 mg/ml 百合花石油醚提取物 9、0.2mg/ml 还原性
VC（阳性）10、0.4mg/ml 还原性VC
11、0.8 mg/ml 还原性VC12、0.01 mg/ml加兰他敏（阳性）
1.2.2 按下列步骤加样、温浴、调零、测定、记录
（1） 将12 支EP 管进行编号为1-12。
（2）将200μl Buffer B、400μl DTNB、200μl ACTI 分别加入到各个管中， 再将不同编号EP 管加入相应编号的受试药物200μl。
（3）温浴20min。
（4） 调零。取温浴样品450μl， 加Buffer B 100μl 摇匀，在紫外分光光度计450nm 处进行调零。
（5） 测定。取温浴样品450μl， 加AChE 100μl 摇匀，在450nm 处进行测定，记录0s、15s、30s、45s、60s 的OD 值（6）清洗，重复（4）（5）步。
1.2.3 计算
（1） 分别计算各样品的ΔOD 值：
ΔOD0-15s、ΔOD0-30s、ΔOD0-45s、ΔOD0-60s
（2）取在线性范围内的ΔOD 值计算抑制率%
1.3 体外抗氧化试验——DPPH 清除实验（1）关于DPPH DPPH 是一种很稳定的氮中心的自由基，在517nm 处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有氧自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析。
自由基清除能力的表示：清除率越大表明抗氧化能力越强。
2 步骤
取96 孔板，根据以下设定加样 1-12号受试物，30min 避光反应，517nm 测定吸光度值。
第一行1-12 格 样品：50μl 受试物+150μlDPPH
第二行1-12 格 空白：50μl 受试物+150μl 乙醇
第三行1-12 格 对照：50μl 溶剂+150μlDPPH
3 结论
（1）百合花提取物都对AChE 具有抑制作用，其中百合花醇提物的抑制作用最强，石油醚提取物次之，水提物相对较弱，并且高浓度提取物均比低浓度提取物有更好的AChE 抑制作用。
（2）百合花水提物浓度与AChE 抑制率成正比，醇提物高浓度比低浓度对AChE 抑制率稍高，而石油醚提取物高浓度与低浓度的AChE 抑制作用相差不大。且三种提取物对AChE 的抑制率均比阳性药加兰他敏要高。
（3）三种百合花提取物对DPPH 均有一定的清除效果，清除率由高到低依次是醇提物、水提物、石油醚提取物；并且高浓度提取物均比低浓度有更高的清除率；我们还发现，还原VC 的清除率比较强，但是100mg/ml 百合花醇提物的清除率甚至超过了0.8mg/ml 的阳性药还原VC。
4 讨论
百合花提取物不仅对AChE 有抑制作用，而且抗氧化作用比还原性VC 还强。
百合花的醇提物比水提物和石油醚提取物抗氧化和抗AChE 的效果都要好，可见不同的提取溶剂会对百合花的抗AChE 与抗氧化作用产生影响。因此百合花的药理作用可为老年痴呆提供新的治疗线索。今后可以着重研究百合花醇提物中真正起作用的化学物质和其作用靶点以及药物构效关系，药代动力学和药理毒理学，判断百合花醇提物能否开发成新一代抗老年痴呆药物，从而为广大患者带来福音，减轻病人与家属的痛苦。
（通讯作者：丁虹）
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参考文献
[1] 吴海燕. 周金云. 治疗阿尔茨海默病药物的研究进展[J]. 中国新药杂志,(2004)13(7):583-586.
[2] 张均田. 老年痴呆的发病机制及防治药物[J]. 医药导报,2002,21(08).
[3] 洪震. 我国阿尔茨海默病的研究现状及展望[J]. 中华神经科杂志,200134(04).
通讯作者简介
丁虹（1964-），女，博士学位。现为武汉大学药学院教授、博士生导师。主要研究方向为药理毒理学。
