朱昭颖
梧州市妇幼保健院妇产科，广西梧州 543002
[摘要] 目的 分析原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达。 方法 选取该院2012年10月—2013年10月间收治的20例原发性羊水过多产妇设为观察组，所有产妇均为剖宫产，另选同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇20例为对照组。对两组产妇的胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达进行分析对比。结果 观察组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为(0.77±0.14)、(0.85±0.16)、（0.57±0.09），对照组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为(0.40±0.06)、(0.35±0.10)、(0.46±0.08)，两组数据结果比较差异有统计学意义(P<0．05)；观察组产妇羊膜、胎盘、绒毛膜和组织中的水通道蛋白8蛋白表达水平分别为[(0.194±0.025、(0.192±0.025、(0.169 ±0.027)]，对照组产妇羊膜、胎盘、绒毛膜和组织中的水通道蛋白8蛋白表达水平分别为[(0.149±0．017、(0.151±0.022、(0.155±0.024)]，两组产妇羊膜、胎盘组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0．05)，而绒毛膜组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 通道蛋白8在产妇羊水量的调节中发挥重要作用。
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关键词 原发性羊水过多；产妇；胎膜；胎盘；水通道蛋白8；表达
[中图分类号] R714.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-074２（２０１4）05（a）－０189-02
[作者简介] 朱昭颖（1971－），女，广东兴宁人，本科，妇产科主治医师，主要从事孕期保健与优生遗传工作。
正常情况下，羊水的产生和吸收保持动态平衡，为胎儿运动、生长和发育提供必需的内环境。而这种动态平衡往往会因为各种因素打破，从而引起羊水量发生异常，大大提高了围产儿发病率和死亡率。临床表明，水通道蛋白8在母胎液和羊水平衡的调节中发挥了重要的作用[1-4]。为进一步分析原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达，该研究选取该院2012年10月—2013年10月间收治的20例原发性羊水过多产妇和同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇进行对比分析，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取该院收治的20名原发性羊水过多产妇设为观察组，所有产妇均为剖宫产，另选同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇设为对照组。所有产妇经产前检查显示各项体征正常，无胎儿畸形、胎膜早破、糖尿病及其他妊娠并发症。观察组中最大年龄为37岁，最小年龄为18岁，平均年龄（25.36±5.63）岁，最长孕周为42周，最短为37周，初产妇12例，经产妇8例；对照组中最大年龄为36岁，最小年龄为19岁，平均年龄（24.57±5.47）岁，最长孕周为42周，最短为37周，初产妇11例，经产妇9例。
1.2 方法
在产妇分娩之后立即取胎膜和胎盘组织标本各2份，采用无菌生理盐水将所取标本漂洗干净，同时将血液尽可能的去除干净。将其中一份标本分离出羊膜、绒毛膜和胎盘组织后置于液氮，另外一份则放置于浓度为4%的多聚甲醛中固定24 h后行石蜡包埋。水通道蛋白8 mRNA表达水平检测采用RT—PCR技术。具体检测步骤为：将预先准备的胎盘及胎膜组织取适量放置于液氮中研磨成粉末，采用由美国Invitrogen公司生产的TRlzol试剂提取总RNA。采用由日本TaKaRa公司生产的RNA PCR试剂盒按照操作规范提取总RNA并逆转录为cDNA，同时进行PCR扩增。PCR反应体系50ul，反应条件为：94℃预变性3 min一个循环；再94℃变性35 s，57℃退火40 s，72℃延伸45 s，共30个循环；最后72℃延伸6 min。PCR产物行1.5%琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统上成像并保存结果。采用Quantity One图像分析系统值分析电泳结果，同时对AQP8产物与B—actin产物的A值的比值进行计算，将计算值作为水通道蛋白8 mRNA的相对表达水平。
水通道蛋白8蛋白表达水平检测采用免疫组化技术。具体步骤为：预先将准备的标本通过浓度为4%的多聚甲醛固定一整天后实施石蜡包埋，切成5 μm的薄片备用。将石蜡切片进行脱蜡和水化处理，然后放进0.01 mol／L枸橼酸钠缓冲液(pH值6．0)中微波修复10~15 min；采用浓度为3%的H2O2去离子水处理10 min，将内源性过氧化物酶活性消除感觉，再按照标准操作规范进行封闭、稀释及显色，最后采用北航CM-2000B型生物医学图像分析系统对免疫组化图片进行分析。在×400的高倍视野下，每张切片随机选取5个视野，测量阳性表达部位的平均A值，以其均值表示AQP8蛋白的相对表达水平。
1.3 统计方法
将该次统计调查的实验数据均录入spss17.0软件包进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，进行t检验。
2 结果
观察组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为（0.77±0.14）、（0.85±0.16）、（0.57±0.09），对照组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为（0.40±0.06）、（0.35±0.10）、（0.46±0.08），两组数据结果比较差异有统计学意义(P<0．05)；观察组产妇羊膜、胎盘、绒毛膜和组织中的水通道蛋白8蛋白表达水平分别为（0.194±0.025）、（0.192±0.025）、（0.169 ±0.027），对照组产妇羊膜、胎盘、绒毛膜和组织中的水通道蛋白8蛋白表达水平分别为（0.149±0．017）、（0.151±0.022）、（0.155±0.024），两组产妇羊膜、胎盘组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0．05)，而绒毛膜组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较有统计学意义差异(P>0.05)。见表1。
3 讨论
据有关临床统计资料表明，羊水的膜内吸收是羊水量调节的重要渠道[5]。目前，大量研究证实，羊水的膜内吸收是羊水量调节的关键途径口。向胎羊血管缓慢注射生理盐水后，胎羊尿液每天可增加4 L，与此同时，羊水的膜内吸收显著增加，从而避免了水过多的发生。我国著名医学研究者黄锦[6]等研究表明，在人和其他动物胎膜及胎盘组织中，AQPl、AQP3、AQP8、AQP9均有表达。其中，AQPl mRNA表现为显著增多，AQP3和AQP9对于水分子具有良好的通透性，除此之外，对尿素和甘油也具有一定的通透性，有研究者提出可能参与了尿素的转运；同时，Koyama[7-10]等通过对非洲爪蟾蜍卵母细胞转染人AQP8基因试验发现，AQP8对水分子具有良好的通透性。我国在上世纪初的时候便有临床试验证实AQP8 mRNA在人羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞、绒毛膜上皮细胞和中均有表达。由此给于我们提示AQP8可能参与了羊水量的调节。
该研究主要采用分组对照的形式，对该院2012年10月—2013年10月间收治的20名原发性羊水过多产妇和同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇进行了研究分析，通过研究结果可以看出，通过RT·PCR技术可检测到羊水过多患者以及正常孕妇及的羊膜、胎盘、绒毛膜中均有水通道蛋白8 mRNA表达，与国内相关文献报道相符合。通过免疫组化法检测结果可以发现，水通道蛋白8蛋白主要表达于羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞、绒毛膜滋养细胞和。观察组产妇水通道蛋白8 mRNA在羊膜、胎盘、绒毛膜组织中的相对表达水平均明显高于对照组；另外，观察组产妇水通道蛋白8胎盘蛋白在羊膜和胎盘组织中的相对表达水平也较对照组明显增加；而绒毛膜组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。分析其原因可能是由于水通道蛋白8 mRNA增加的幅度较小等因素引起。同时，通过该次研究发现，当产妇的羊水量过多的时候，羊膜组织水通道蛋白8 mRNA和蛋白的表达上调，它可能会引起羊膜增加，从而增加了对水的通透性，最终促进了羊水的膜内吸收，当水分吸收量增大时，就会使胎盘组织中水通道蛋白8 mRNA和蛋白表达上调，从而促进了母胎间经胎盘的水转运过程，有利于排出胎儿体内过多的水分。由此给于我们提示，水通道蛋白8在羊水量的调节中可能发挥代偿作用，根据这一思路可进行深一步的羊水量异常治疗研究。
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参考文献
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（收稿日期：2014-01-14）
