江苏省无锡市市北高级中学生物组(214000)黄芳
1前言
“微生物的实验室培养”是人教版高中生物学“生物技术实践”模块中的重要学生活动。该课题中包括了培养基配制，微生物接种，微生物菌落形态观察以及微生物的分离纯化。这部分内容与人们的生活息息相关，学生也对实验充满兴趣，但按照教材实验设计及顺序安排实验会遇到一系列问题（如菌种的来源及保存，无菌条件等）。因此，笔者设计此实验，希望通过此实验让学生掌握微生物实验室培养的操作。
2培养基的配置及灭菌
按照教材方法与步骤配置牛肉膏蛋白胨固体培养基。并将实验所需的培养皿以及配置好的培养基进行高压蒸汽灭菌。
3培养手指上的微生物菌落并计数
3.1倒平板
待培养基冷却凝固后，将每个培养皿底部用记号笔均分为两份。一侧用未清洗过的手指均匀涂抹培养基表面；另一侧用洗手液或者香皂清洗过的手指均匀涂抹培养基表面（需要标注区分两侧）。实验操作时，将学生分为两组，一组学生探究不同品牌洗手液的抑菌效果；另一组学生探究不同品牌香皂的抑菌效果。
3.2培养
在28 ℃的条件下，培养微生物48 h后（若环境温度较低，需要延
长培养时间），
观察培养基表面的菌落的种类和数量，如图1所示。
3.3统计菌落数
设计表格统计菌落数，见表1。
4分离培养手指上的微生物
在培养基上不同形态的菌落中分别取菌种，然后用划线法接种到培养皿中进行单独培养。将各培养皿标记后置于培养箱中培养48 h，观察菌落的形态及颜色。
5观察抑菌圈比较抑菌效果
5.1制备洗手液和香皂溶液和滤纸片
称取等量洗手液与香皂分别与等量的蒸馏水混合后搅拌溶解备用。将滤纸剪成半径为6 mm的小圆片，将滤纸片与制备的溶液充分混合后靠在小烧杯壁，一段时间后待用。
5.2纸片琼脂扩散法检测抑菌圈
用涂布法分别将分离培养的各种微生物接种至灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基上。将含有香皂和洗手液的滤纸片用灼烧灭菌的镊子分别贴在涂布接种微生物的培养基的表面，相互间隔一定的距离，置于室内倒置培养。
5.3观察并测量抑菌圈大小
28 ℃条件下培养48 h后（若环境温度较低，需要延长培养时间），观察是否有抑菌圈的出现，并测量抑菌圈大小，如图2所示。
6教学结果与反思
实验中学生可以直观地观察到不同的菌落形态，根据菌落形态的不同可以判断出微生物的种类不同，同时理解我们生活的环境及体表均有微生物存在。通过统计洗手前后培养基表面的菌落数量，可以发现洗手后培养基上微生物菌落数量确实少于洗手前。为了防止“病从口入”，勤洗手很重要。
在整个实验过程中，学生可以深刻理解微生物培养中无菌操作的重要性，也能体验微生物实验室培养的一般过程和方法。
在实验中还发现温度对微生物培养的影响较大，若环境温度较低，则需要一周左右才能观察到微生物菌落。因此，这个实验放在夏季做更好，能缩短实验周期。
在中学实验教学中，尝试设计更多与生活相关的实验，更能提高学生的实验兴趣和联系生活实际的能力。
收稿日期：2014-06-07
