杨江媛
云南省中医医院，云南昆明650000
【摘要】目的：考察猫须草的最佳提取工艺。方法：以猫须草提取物中总黄酮的含量为指标，对提取工艺进行考察，以确定猫须草的最佳提取工艺。结果：15倍量的水浸泡药材10h后，80℃加热提取2次，每次3h。结论：收率较好，该工艺条件可行。
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关键词 猫须草；总黄酮；提取；收率
【中图分类号】R284.2【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）04-0024-02
猫须草Clerodendranthus spicatus （Thunb.）C. Y. Wu又名肾茶、牙努秒、猫须公，为唇形科肾茶属植物。该属植物全世界仅有5种，产于东南亚的印度尼西亚、马来西亚等东南亚国家，澳大利亚有少量分布。我国仅有猫须草一种，主要分布于广东、海南、广西南部、云南南部、台湾及福建，常生于林下潮湿处。从上世纪起，我国多地引种栽培，其中以云南种植最多［1］。猫须草清凉消炎，可全草入药，味苦，性凉。书中记载猫须草用以治疗小便热、涩、疼痛等泌尿系统疾病。民间认为猫须草具有利尿、抗菌、消炎、溶石、排石和抗肿瘤作用，用于治疗急慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石、风湿下肢关节炎和咽炎有特殊疗效［2］。有文献报道猫须草中的主要化学成分为黄酮类化合物，为控制猫须草的质量，提高猫须草中有效成分的含量，对猫须草的提取工艺进行研究和优化，为猫须草的优质开发利用提供理论依据。
1材料
1.1试验器材电子天平（十万分之一，赛多利斯科学仪器有限公司）、电子天平（万分之一，赛多利斯科学仪器有限公司）、NKSY型智能恒温水浴锅（常州诺基仪器有限公司）、3695-Ⅱ型紫外分光光度计（菲尔伯恩实业发展有限公司）、昆山超声清洗仪（安徽东南仪诚试验室设备有限公司）
1.2对照品芦丁（中国食品药品检验所，批号：121268-200904）
1.3药材猫须草（采购自昆明市菊花村中药材市场）
2方法与结果
2.1总黄酮含量测定方法
2.1.1对照品溶液制备精密称取芦丁对照品16.42mg，加甲醇适量置水浴上微热使溶解，放冷，甲醇定容至50ml，摇匀，即得浓度为0.3284mg/ml的芦丁对照品溶液。
2.1.2标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.5、1、1.5、2、3、4、5、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6min，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（附录ⅤA），在509nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果见表1。
以芦丁含量（μg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出总黄酮的标准曲线为：Y=0.0107X+0.0012，R2=0.9993，线性范围为6.568~78.816μg/ml。
2.1.3供试品制备称取浸膏适量，精密称定，置25 ml锥形瓶中，精密称定，加甲醇10 ml超声处理10 min，放冷，精密称定，甲醇补足重量，摇匀。精密量取5 ml，置10 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，置25 ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸收度从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度（μg/ml），计算即得。
2.1.4水提液供试品溶液的制备称取各个单因素考察后的干浸膏约0.5g至锥形瓶中，精密称定，50%甲醇水30ml浸泡1h，超声提取30 min，放冷，过滤，回收滤液至5ml，用0.45μm的微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
2.2药材含量测定
2.2.1样品制备称取猫须草药材2份，每份5g，加入100ml甲醇浸泡4h，80℃加热提取1h，过滤，滤渣再加入100ml甲醇同法提取1h，反复提取4~5次至提取完全，合并滤液，减压回收溶剂，浓缩液转移至蒸发皿中，挥干溶剂至恒重，称定浸膏重量，待测。
2.2.2药材中总黄酮的含量按照2.1.3 项下总黄酮含量测定的方法，测定药材中总黄酮的含量，测定结果见表2。
2.3提取工艺考察
2.3.1浸泡时间取药材10g，按照提取工艺，加入10倍量水分别浸泡药材1、2、4、6、10h后，70℃温浸提取2h，过滤，收集滤液，滤渣同法提取1次，合并滤液，减压回收溶剂至干，测定浸膏出膏率及总黄酮含量，滤渣烘干备用，结果见表3。
加权评分=干浸膏含量×50%+总黄酮含量×50%
表3数据表明，当药材提取前浸泡10h，浸膏含量及总黄酮含量均较高，加权评分最大，因此药材浸泡时间为10h。
2.3.2提取温度取药材10g，按照提取工艺，加入10倍量水浸泡药粉10h后，分别于40、50、60、70、80℃浸渍提取2h，过滤，收集滤液，滤渣同法提取1次，合并滤液，减压回收溶剂至干，测定浸膏出膏率及总黄酮含量，滤渣烘干备用，结果见表4。
表4数据表明，当药材提取温度为80℃时，浸膏含量及总黄酮含量均较高，加权评分最大，因此药材提取温度为80℃。
2.3.3水用量取药材10g，按照提取工艺，分别加入6、8、10、12、15倍量水浸泡药粉10h后，80℃加热提取1h，过滤，收集滤液，滤渣同法提取1次，合并滤液，减压回收溶剂至干，测定浸膏出膏率及总黄酮含量，滤渣烘干备用，结果见表5。
表5数据表明，当提取溶剂为药材的15倍量时，浸膏含量及总黄酮含量均较高，加权评分最大，因此水用量为药材的15倍量/次。
2.3.4提取时间取药材10g，按照提取工艺，加入15倍量水浸泡药粉10h后，分别80℃加热提取0.5、1.0、1.5、2.0、3.0h，过滤，收集滤液，滤渣同法提取1次，减压回收溶剂至干，测定出膏率及总黄酮含量，滤渣烘干备用，结果见表6。
表6数据表明，当药材提取时间为3h时，浸膏含量及总黄酮含量均较高，加权评分最大，因此药材提取时间为3h，此时提取率较高且经济效益也高。
2.3.5水提优选试验方案由以上单因素考察的结果可知，药材的水提最佳提取工艺条件为：15倍量的水浸泡药材10h后，80℃加热提取2次，每次3h。
2.4水提取小试结果取药材5份，每份10g，加入15倍量的水浸泡药材10h后，80℃加热提取3h，过滤，收集滤液，滤渣同法提取1次，合并滤液，减压回收溶剂至干，测定浸膏出膏率及总黄酮含量，滤渣烘干备用，结果见表7。
由表7看出，水提工艺重复提取5份药材RSD值满足要求，表明该提取工艺稳定可行。
3结论
对猫须草药材进行水提取后，对提取物中的总黄酮含量进行测定后发现提取物中总黄酮含量提高了2~3倍。但是由于黄酮苷类易溶于水，而黄酮类化合物大多易溶于醇类，为进一步提高猫须草中总黄酮的提取率，下一步实验拟对水提取后的猫须草药渣进行低温干燥处理后再次进行醇提工艺的考察，以提高药材的利用率。
猫须草是我国西南地区特有的少数民族药，经过长期实践，猫须草在治疗泌尿系统疾病方面具有显著的疗效。然而，由于缺乏系统完整的研究，大多数民族药还停留在地区甚至更小的范围内用药，一些具有显著疗效的民族药还没有得到充分的推广使用。对猫须草提取工艺的研究，不仅有利于民族医药的推广使用，而且也对民族医药的发展起到极大的推动作用。
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参考文献
［1］许娜，许旭东，杨峻山. 猫须草的研究进展［J］.中草药，2010，41（5）：12-16.
［2］任文辉，洪俪芳.猫须草的药理作用研究进展［J］.中草药，2013，44（20）：2946-2950.
［3］高增平，王宝华，江佩芬.不同产地猫须草化学成分预试及熊果酸含量对比［J］. 北京中医药大学学报，1999，22（5）：78-79.
［4］颜文祝，吕于谋，沈文通.猫须草主要化学成分初步预试［J］.海峡药学，1995，7（3）：3-4.
（收稿日期：2014.11.20）
