杨曌斌?
（黑龙江省牡丹江市畜牧兽医局 157000）
布氏杆菌病是家畜的一种慢性传染病，主要侵害生殖系统。感染后，以母畜发生流产和公畜发生睾丸炎为特征，可应用血清学方法检出血清中有抗体存在，则说明被检动物为布氏杆菌病畜。动物感染布氏杆菌以后首先出现的是凝集抗体，再过一段时间才出现补体结合抗体，最后产生变态反应性。补体结合反应是一种高度特异性的，其阳性反应与感染的符合率，比血清凝集试验与感染的符合率高。此种方法用来鉴别注苗后和自然感染所引起的血清学反应很有价值，如4～8个月犊牛注射19号菌苗，经过6个月后补体结合反应为阴性，而血清凝集反应仍为阳性或可疑。我国的家畜布氏杆菌病检疫应用的免疫生物学方法主要是凝集试验，补体结合试验及变态反应试验。本试验按《家畜布氏杆菌病试管凝集反应技术操作规程及判定标准》进行。?
1 材料准备?
抗原由兽医生物药品厂生产供应。使用时用0.5%石炭酸生理盐水作1∶20稀释，长霉或出现凝集块的抗原不能应用。被检血清必须新鲜无明显蛋白凝固，无溶血现象和腐败气味。阳性血清和阴性血清由兽医生物药品厂生产供应。稀释液为?0.5%?石炭酸生理盐水，用化学纯石炭酸与氯化钠配制，经高压灭菌后备用。检疫羊用稀释液用0.5%石炭酸、10%氯化钠溶液。?
2 操作步骤?
牛、马、骆驼用1∶50、1∶100、1∶200、1∶400四个稀释度；猪、山羊、绵羊和犬用1∶25、1∶50、?1∶?100、 1∶200四个稀释度。稀释血清和抗原加入方法：取5支小试管先加入稀释液0.5%石炭酸生理盐水，第一管加2.3mL，从第二管不加，第3、4、5管加?0.5mL?。取被检血清0.2mL加入到第一管中，混匀，分别取0.5mL加入2、3管中。将第三管混匀，吸0.5mL加入第四管，混匀，吸0.5mL加入第五管。血清最后稀释度为1∶25、1∶50、1∶100、?1∶?200，震荡使血清和抗原充分混合，放入37℃温箱18~20h，取出后室温静置2h，记录每管的反应情况，出现50%以上凝集的最高稀释度就是这份血清的凝集价。
实验应该设立阴性血清对照、阳性血清对照和抗原对照。阴性血清对照：操作步骤与被检血清相同。阳性血清对照：阳性血清稀释到原有滴度，其他同上。抗原对照：已稀释抗原0.5mL，稀释液0.5mL。?
牛、马、骆驼血清凝集价在1∶100以上；猪、山羊、绵羊和犬在1∶50以上，判定为阳性。牛、马、骆驼血清凝集价在1∶50以上；猪、山羊、绵羊和犬在1∶25以上，判定为可疑。可疑家畜经过3~4周重检，牛、羊重检仍然为可疑，可判定为阳性，猪、马重检仍然为可疑，但是无临床症状判定为阴性。试管凝集试验也可用简便方式进行，即以0.2mL吸管将被检血清以0.08、0.04、0.02及0.01分别加人4支小试管内，然后每管加人1∶40稀释的抗原1mL，充分摇匀，这样4管血清的最后稀释度分别为1∶25、1∶50、1∶100、1∶2000。?
牛、马和骆驼的血清稀释和加抗原的方法与前述者一致，不同的仅第一管加稀释液2.4mL及被检血清0.1mL。加抗原后从第2~5管血清稀释度依次为1∶50、1∶100、1∶200和1∶400。?
每次试验须作三种对照，阴性血清对照的操作步骤与被检血清者相同。阳性血清对照须将血清稀释到其原有滴度，其他步骤同上。抗原对照即将当时使用的乙稀释抗原0.5mL，稀释液0.5mL。每次试验须制备比浊管，以为记录结果的依据，配制方法即以当时使用的已稀释抗原加等量稀释液，?
全部试管充分振荡后，置37～38℃温箱中，?22～?24h后用比浊管对照检查记录结果。出现50%以上凝集的最高稀释度就是这份血清的凝集价，因此50%亮度的比浊管很重要。?
3 结果判定
牛、马和骆驼血清凝集价为1∶100以上，猪、羊和犬1∶50以上者，判为阳性。牛、马和骆驼血清凝集价为1∶50，猪、羊和犬为1∶25者判为可疑。可疑反应的家畜经3～4周重检，牛、羊重检时仍为可疑，判为阳性。猪和马重检时仍为可疑，但农场中未出现阳性反应及无临诊症状的家畜，判为阴性。?
鉴于猪血清常有个别出现非特异性凝集反应在试验时须结合流行病学判定结果。如果出现个别弱阳性，但猪群中均无临诊症状，可以考虑此种反应为非特异性，经3～4周可采血重检。
