苟体忠ａ，ｂ，雷小朋ｃ，徐绍琴ｄ，孙大方ａ，陈永婷ａ，彭章美ａ
（凯里学院，ａ．化学与材料工程学院；ｂ．应用化学研究所；ｃ．人事处；ｄ．继续教育学院，贵州 凯里 ５５６０１１）
摘要：采用总抗氧化能力、ＯＨ·清除率、ＤＰＰＨ·清除率来考察甜草（Ｏｌｄｅｎｌａｎｄｉａ ｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓ Ｈｏｗ）总多酚的体外抗氧化活性。结果表明，甜草总多酚总抗氧化能力略小于维生素Ｃ（ＶＣ），但甜草总多酚ＯＨ·清除率远高于ＶＣ。此外，甜草总多酚对ＤＰＰＨ·的ＩＣ５０（２２．２ μｇ／ｍＬ）与ＶＣ相近（１６．０ μｇ／ｍＬ）。甜草总多酚是天然的抗氧化活性剂和自由基清除剂。
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关键词 ：甜草（Ｏｌｄｅｎｌａｎｄｉａ ｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓ Ｈｏｗ）；总多酚；抗氧化活性；ＯＨ·清除率；ＤＰＰＨ·清除率
中图分类号：Ｒ９６１；Ｓ５６７．２１ 文献标识码：Ａ 文章编号：０４３９－８１１４（２０１５）０4－０947－０３
ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．０4．０44
收稿日期：２０１４－０６－３０
基金项目：贵州省科学技术厅自然科学基金项目［黔科合Ｊ字（２０１１）２０７９号］；凯里学院博士专项基金；贵州省高校优秀科技创新人才计划项目［黔教合ＫＹ字（２０１２）０９９号］；贵州省教育厅高层次人才引进项目（院科通（２０１２）７号）；凯里学院重点项目（Ｚ１２０２）；贵州省特色重点学科资助项目［黔教高发（２０１１）２０８号］；凯里学院重点学科资助项目［院通字（２０１０）８６号］
作者简介：苟体忠（１９８１－），男，贵州桐梓人，副教授，博士，主要从事天然药物化学研究，（电话）１５２８６３９８５１２（电子信箱）ｇｔｚ８１０１１０＠１２６．ｃｏｍ。
甜草（Ｏｌｄｅｎｌａｎｄｉａ ｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓ Ｈｏｗ），又名野甘草、山甘草，是双子叶茜草科植物广州耳草的全草，其性平，味甘，具有清热解毒之功效。甜草主要分布在广东、江西等地。目前，甜草已被简单加工为类似于茶叶的保健品，晒干的全草经开水浸泡即可饮用。蓝文建等［１，２］从甜草乙醇提取物中分离得到了五环三萜化合物，该化合物对胃腺癌细胞和肝癌细胞具有抑制作用。但甜草多酚抗氧化活性的研究尚未见报道，因此，本研究分析了甜草总多酚的抗氧化活性，从而为甜草的综合利用提供理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 样品 甜草样品购于２０１３年７月的凯里第二届民间工艺品博览会。甜草成品于８０ ℃烘箱中烘干，再用粉碎机粉碎并过２００目尼龙筛，待用。
１．１．２ 仪器与试剂 紫外分光光度计（ＵＶ－２５５０型，岛津）；植物粉碎机（北京科伟永兴仪器有限公司）；水浴振荡器（ＳＨＡ－Ｃ型，巩义予华仪器有限公司）；超声波清洗机（ＷＨ－３００型，济宁万和超声电子设备有限公司）；低速离心机（ＴＤ５Ｍ型，长沙湘智离心机仪器有限公司）；电子天平（上海衡平仪器仪表厂）。三氯乙酸、没食子酸均为分析纯，１，１－二苯－２－苦基肼自由基（ＤＰＰＨ自由基）、Ｆｏｌｉｎ-Cｉｏｃａｌｔｅｕ’ｓ 酚试剂为ａｌａｄｄｉｎ试剂。
１．２ 方法
１．２．１ 样品处理与总多酚的提取 称取约２ ｇ上述样品于５０ ｍＬ离心管中，依次用石油醚、二氯甲烷、８０％乙醇连续提取，其工艺条件经正交试验确定最佳萃取条件为：料液比为１∶２０（ｇ∶ｍＬ），２４０ Ｗ超声波间歇提取２次，每次３０ ｍｉｎ，离心取上层清液合并，再置于５０ ｍＬ容量瓶中并用相应试剂定容至刻度，摇匀，待测。
１．２．２ 总多酚测定 总多酚含量的测定参照文献［３］并稍作修改。其简要流程为：准确称取０．１２５ ｇ没食子酸以去离子水定容至１ ０００ ｍＬ。分别吸取该标准溶液０、１、２、３、４、５ ｍＬ于６个２５ ｍＬ比色管中，先加去离子水至１０ ｍＬ，摇匀，再加入Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ（ＦＣ）酚试剂１．０ ｍＬ，混匀，然后加入６．０ ｍＬ １０％Ｎａ２ＣＯ３溶液，并用去离子水定溶至刻度，摇匀。然后在暗室中放置２ ｈ，并于７６０ ｎｍ波长下测定其吸光度。以没食子酸浓度（Ｃ）为横坐标，吸光度（Ａ）为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Ａ＝０．０８３ ５Ｃ＋０．０２（ｒ＝０．９９９ ８）。取乙醇提取液０．２ ｍＬ于２５ ｍＬ比色管中，按上述步骤测定其吸光度，再根据回归方程计算样品溶液总多酚的浓度，并以此计算样品总多酚含量，以每克样品中没食子酸当量表示（ｍｇＧＡＥ／ｇ）。
１．２．３ 醇提物总抗氧化能力测定 总抗氧化能力的测定方法参照文献［４］，其简要流程为：取１ ｍＬ不同浓度的提取液，并依次加入２．５ ｍＬ的 ｐＨ ６．６ 的磷酸盐缓冲液和１％ 铁氰化钾［Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６］溶液，摇匀并置于５０ ℃水浴振荡器中２０ ｍｉｎ。然后加入２．５ ｍＬ １０％三氯乙酸溶液，摇匀并取混液 ２．５ ｍＬ，再加入２．５ ｍＬ 去离子水以及 ０．１％氯化铁溶液，摇匀并静置１０ ｍｉｎ，在７００ ｎｍ处测定吸光度（Ａｓ），以超纯水代替提取液作为空白并测定其吸光度Ａｃ。则总抗氧化能力可以用ΔＡ来表示（ΔＡ＝Ａｓ－Ａｃ），其值越大，提取液抗氧化能力越强。
１．２．４ ＯＨ·清除率的测定 ＯＨ·清除率的测定方法参照文献［４］，其简要流程为：在２５ ｍＬ比色管中依次加入４ ｍＬ ｐＨ ７．４ 磷酸盐缓冲液和１．５ ｍＬ ５ ｍｍｏｌ／Ｌ 邻二氮菲溶液、１ ｍＬ ７．５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＦｅＳＯ４溶液、１．５ ｍＬ去离子水，摇匀，再加入１ ｍＬ不同浓度的提取液，立即摇匀。最后加入１．０ ｍＬ １％ Ｈ２Ｏ２溶液，摇匀并置于３７ ℃恒温水浴中恒温６０ ｍｉｎ，再于５３６ ｎｍ处测定其吸光度。根据下式计算样品的ＯＨ·清除率：
ＯＨ·清除率＝［（Ａ１－Ａ２）／（Ａ０－Ａ２）］×１００％
其中，Ａ１为加入提取液及Ｈ２Ｏ２时测得的吸光度；Ａ２为加 Ｈ２Ｏ２而不加提取液时测得的吸光度；Ａ０为不加提取液及 Ｈ２Ｏ２时测得的吸光度。
１．２．５ ＤＰＰＨ·清除率测定 ＤＰＰＨ·清除率的测定方法参照文献［５］，其简要流程为：在２５ ｍＬ比色管中依次加入２ ｍＬ ２×１０－４ ｍｏｌ／Ｌ ＤＰＰＨ·溶液和２ ｍＬ不同浓度的提取液，摇匀，并在暗室中放置３０ ｍｉｎ，以无水乙醇为参比液，在５１７ ｎｍ下测定其吸光度Ａ3，同时测定２ ｍＬ ２×１０－４ ｍｏｌ／Ｌ ＤＰＰＨ·溶液与２ ｍＬ无水乙醇混合液的吸光度Ａ4。根据下式计算样品提取液对ＤＰＰＨ·的清除率：
ＤＰＰＨ·的清除率＝（１－Ａ3／Ａ4）×１００％
２ 结果与分析
２．１ 甜草多酚含量的测定结果
甜草不同试剂提取物中多酚含量见表１。由表１可知，甜草总多酚在各提取剂中的分布特征为：８０％乙醇＞石油醚＞二氯甲烷，甜草总多酚在以８０％乙醇为提取剂的含量为５１．２５ ｍｇ ＧＡＥ／ｇ。
２．２ 甜草总多酚的总抗氧化能力
经相关分析表明，甜草总多酚对总抗氧化能力的相关系数为０．９８２ ３，维生素Ｃ（ＶＣ）对总抗氧化能力的相关系数为０．９９４ ９，这表明总多酚和ＶＣ含量与总抗氧化能力之间呈明显正相关关系。差异分析表明，甜草总多酚和ＶＣ浓度对总抗氧化能力的影响显著，这表明甜草醇提物的抗氧化能力是由多酚成分决定的。国外学者研究也表明，含有高水平总多酚的植物表现出很好的体外抗氧化活性［６］。由图１可知，随着浓度的增加甜草总多酚以及ＶＣ总抗氧化能力增加，但甜草总多酚总抗氧化能力略低于ＶＣ。
２．３ 甜草总多酚对ＯＨ·的清除率
经相关分析表明，甜草总多酚对ＯＨ·的清除率的相关系数为０．９８４ ０，ＶＣ对ＯＨ·清除率的相关系数为０．８９１ ６，这表明总多酚和ＶＣ含量与ＯＨ·的清除率之间呈明显正相关关系。差异分析表明，甜草总多酚浓度与ＯＨ·清除率之间存在显著差异，这表明甜草醇提物清除ＯＨ·的活性是由多酚成分决定的。由图２可知，随着浓度的增加，甜草总多酚清除ＯＨ·效率明显增加。然而，ＶＣ对ＯＨ·的清除效率影响较小，且明显低于甜草多酚对ＯＨ·的清除效率。
２．４ 甜草总多酚对ＤＰＰＨ·的清除率
经相关分析表明，甜草总多酚对ＤＰＰＨ·的清除率的相关系数为０．９９５ ５，ＶＣ对ＤＰＰＨ·的清除率的相关系数为０．９９８ ７。差异分析表明，甜草总多酚浓度与ＤＰＰＨ·的清除率之间存在显著差异，这表明甜草醇提物清除ＤＰＰＨ·的活性是由多酚成分决定的。由图３可知，随着甜草总多酚和ＶＣ浓度的增加，其清除ＤＰＰＨ·的活性增加，但是甜草总多酚对ＤＰＰＨ·的清除率略低于ＶＣ。以甜草总多酚和ＶＣ浓度对ＤＰＰＨ·的清除率作回归分析。甜草总多酚对ＤＰＰＨ·的清除率的回归方程为：Ｙ＝１．８６２ ６Ｘ＋８．７３２ １（ｒ＝０．９９５ ５）。ＶＣ对ＤＰＰＨ·的清除率的回归方程为Ｙ＝２．５９５ ７Ｘ＋８．３６５ ２（ｒ＝０．９９８ ７）。当ＤＰＰＨ·的清除率为５０％时对应甜草总多酚和ＶＣ的浓度即为ＩＣ５０。经计算甜草总多酚和ＶＣ的ＩＣ５０分别为２２．２ μｇ／ｍＬ和１６．０ μｇ／ｍＬ。
３ 小结
１）甜草总多酚在各提取剂中的分布特征为：８０％乙醇＞石油醚＞二氯甲烷，且甜草总多酚在以８０％乙醇为提取剂的含量为５１．２５ ｍｇＧＡＥ／ｇ。
２）甜草总多酚总抗氧化能力略低于ＶＣ，具有一定的还原能力。
３）甜草总多酚对ＯＨ·的清除效率明显高于ＶＣ，是良好的ＯＨ·清除剂。
４）甜草总多酚对ＤＰＰＨ·的ＩＣ５０（２２．２ μｇ／ｍＬ）与ＶＣ相近（１６．０ μｇ／ｍＬ），表明甜草总多酚具有较好的抗氧化活性，是天然的抗氧化活性剂。
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参考文献：
［１］ 蓝文建，李后金．甜草（Ｏｌｄｅｎｌａｎｄｉａ ｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓ Ｈｏｗ）的化学成分［Ｊ］．应用化学，２００６，２３（８）：８７１－８７４．
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（责任编辑 龙小玲）
